一、PCR扩增检测实验室布局设计问题
从行业标准来讲,PCR扩增检测实验室需要设计布局四大区域,且这四大区域不能挨着,要相对独立,处于分隔状态,包括空气都不能相通。但根据使用仪器的不同功能,有些区域可以适当合并。
一区域:试剂存储和准备区域
该区域主要用于贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备,以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。
二区域:标本制备区
该区域主要用于核酸提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于接触临床样本实操,要满足生物安全二级实验室操作规范、防护设备、个人防护要求。
三区域:扩增区
该区域主要用于核酸合成、扩增、检测。
四区域:扩增产物分析区
该区域主要用于扩增片段的进一步分析测定。
二、PCR扩增检测实验室气流问题
PCR扩增检测实验室空气流向要按照试剂存储和准备区流向标本制备区,再流向扩增区、扩增产物分析区,为了防止扩增产物从空气气流流入扩增前的区域,也可以按照试剂存储和准备区流向标准制备区,再流向扩增区和扩增产物分析区这个方向,空气气压递减的方式进行。
三、PCR扩增检测实验室人流物流问题
1)、试剂存储和准备区。贮存试剂和用于标本制备的消耗品等材料应当直接运送至试剂贮存和准备区,不能经过扩增检测区,试剂盒中的阳性对照品及质控品不应当保存在该区,应当保存在标本处理区。
2)、标本制备区。针对有可能会发生气溶胶所致的污染,可通过在本区内设立正压条件,避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。为避免样本间的交叉污染,加入待测核酸后,必须盖好含反应混合液的反应管。对具有潜在传染危险性的材料,必须在生物安全柜内开盖,并有明确的样本处理和灭活程序。
3)、扩增区。为避免气溶胶所致的污染,应当尽量减少在本区内的走动。必须注意的是,所有经过检测的反应管不得在此区域打开。
4)、扩增产物分析区。核酸扩增后产物的分析方法多种多样,如膜上或微孔板或芯片上探针杂交方法、直接或酶切后琼 脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、核酸测序方法、质谱分析等。
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